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技術文章 / article
ATCC細胞系的細胞培養(yǎng)步驟
原載自：m.zhongkai58.com[技術資料頻道] 2017-12-21 瀏覽次數：2643
ATCC細胞系作為正常或腫瘤組織的模式細胞被廣泛應用于科學研究和藥物開發(fā)，然而很大一部分的細胞系被錯誤標記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代，由于科學界無法解決此類問題以致大量因使用錯誤鑒定的細胞系而導致誤導或存在潛在錯誤的學術論文發(fā)表。通過近年來的努力而開發(fā)出的STR分型方法已成為對人源細胞進行鑒定的標準方法，STR分型的應用成為*細胞錯誤鑒定這一問題的重要一步。
ATCC細胞系的細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備培養(yǎng)基；北美胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．ATCC細胞系的菌種處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
